Srovnání laboratorních vyšetřovacích metod vysokoúčinné kapalinové chromatografie a kapalinové chromatografie s hmotnostní spektrometrií pro stanovení cytostatik při léčbě pacientů s myeloidní leukémií

Abstract

Tato diplomová práce se zabývá metodami vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) a kapalinové chromatografie s hmotnostní spektrometrií (LC-MS/MS), které jsou využívány pro stanovení busulfanu při léčbě pacientů s akutní myeloidní leukémií (AML). Hlavním úkolem této práce je porovnat tyto laboratorní vyšetřovací metody HPLC a LC-MS/MS a provést zhodnocení pro rutinní využití. Diplomová práce se v první části zabývá problematikou diagnostiky AML a její léčby, popisuje metabolismus busulfanu a jeho farmakodynamické a farmakokinetické vztahy, metody a principy chromatografických metod HPLC a LC-MS/MS. Praktická část diplomové práce je zaměřena na realizaci měření stanovení busulfanu u pacientů s AML pomocí HPLC a LC-MS/MS. V experimentální části byla popsána laboratorní příprava reagencií, vzorků a chromatografické podmínky jednotlivých metod HPLC a LC-MS/MS. Následně bylo provedeno stanovení hladin busulfanu u 204 pacientských vzorků pomocí HPLC a LC-MS/MS. Výsledky byly statisticky zpracované v programu MS Excel a Statistica 7. V závěrečné části byly vyhodnoceny výhody a nevýhody testovaných metod jak z hlediska samotného analytického provedení metod, tak i z hlediska klinického přínosu.

This diploma thesis focuses on methods High Performance Liquid Chromatography (HPLC) and Liquid Chromatography with Mass Spectrometry (LC-MS/MS) which are used to determine busulfan during the treatment of patients with acute myeloid leukemia (AML). The aim of this work is to compare these methods HPLC and LC-MS/MS for clinical use. First part of the thesis describes diagnostics of AML and issues related to its treatment, namely metabolism of busulfan, its pharmacodynamic and pharmacokinetic relationships, methods, and the principles of HPLC and LC-MS/MS methods. Practical part focuses on determination of busulfan by HPLC and LC-MS/MS, which is necessary for the treatment of patient with AML. This part describes the preparation of reagens, samples, and also the chromatographic conditions for both methods. After the preparation phase the levels of busulfan were determined in 204 patients’ samples by both methods HPLC and LC-MS/MS. The statistical evaluation was done using MS Excel and Statistics 7. In conclusion, advantages and disadvantages of both methods in term of analytical performance and clinical benefits were evaluated.